山东省泰安市中心医院妇产科；山东泰安271000　蒋满喜（综述）；于新艳（审校）

关键词：染色体异常；荧光原痊杂交；核型分析；种植前

摘要：核型分析是诊断人类胚胎染色体异常的常规方法，但是通过细胞遗传学方法对人类种植前胚胎进行染色体检测并不容易。因此分裂间期细胞核的荧光原位杂交（FISH）就成为首选方法之一。体外受精（IVF）种植前胚胎的FISH和核型分析均表明：胚胎的染色体异常率可高达25%～51%。FISH分析显示染色体异常最常见的情况是染色体嵌合（22%～24%）和胚胎分裂紊乱（7%～26%）。虽然目前还不能应用以上方法对自然受精的胚胎进行检测，但是染色体嵌合以及胚胎分析紊乱较高的发生率可以为我们合理的解释人类的月经周期自然妊娠率为什么如此之低（25%），提供理论今年。

人是哺乳动物中生育能力较差的物种之一。研究表明正常女性的每个月经周期自然妊娠率约为25%，怀孕的前三个月流产易发期。发生自然流产的原因可能有多种，其中包括男性因素、女性因素或胚胎自身因素。众所周知导致胚胎早期丢失的主要原因是染色体异常，怀孕前三个月所发生的自然流产中有50%～70%是染色体异常。

体外受精-胚胎移植（IVF-ET）时经常会发生早期流产。IVF的种植前胚胎丢失率以及生化妊娠率比我们预想的要高。Schlman等人估计大约42%的胚胎在孕7周之前就已经发生流产。对IVF胚胎造成影响的原因一般包括培养条件、激素刺激或者胚胎形成，以及染色体异常等诸多方面，特别是染色体异常可能是造成胚胎早期流产的主导因素。

IVF为人类配子、合子以及种植前胚胎染色体组成的研究提供了便利。种植前胚胎的细胞遗传学研究是人类生殖医学技术的重要组成部分，而且还有助于我们对人类生殖机理的认识。

1、人类种植前胚胎的细胞遗传学分析

人类种植前胚胎染色体组成的分析方法主要有两种：核型分析和原位杂交。 1.1核型分析

核型分析是对人类种植前染色体异常胚胎进行诊断的重要手段。然而对人类种植前染色体异常胚胎进行常规的细胞遗传学检测，同时又具有相当的困难。首先胚胎必须具备继续发育的潜能，而且只能检测分裂中期的细胞核，发育停滞的胚胎不适于核型分析。另外分析染色本条数及带型时还必需进行适当的固定。

人类种植前胚胎染色体组成分析，以往常用的方法是用抗有丝分裂剂处理分裂期的早期胚胎，使其停滞在分裂中期然后过夜培养，接着除去透明带（ZP），分散卵裂球并进行固定。但只有极少数卵裂球处于分裂中期，很难获得最佳的染色体丢失。近来有文献表明这种分析方法的成功率极低（29%），而且无法检测染色体嵌合的情况。

另一种方法是，对胚胎活检获得单个卵裂球用抗有丝分裂剂处理后立即进行过夜培养。Santalo等曾对17个二倍体胚胎进行单个卵裂球活检，染色体制备的成功率可达46%，而且其中有75%的样本可进行染色体分析。但是使用这种方法染色体丢失也是无法避免的问题。对囊胚进行取样检测是最近才发展起来的一种方法。Clouston等人发现81.9%的囊胚可以正常分裂成小的卵裂球，而且大约2/3的中期卵裂球可以进行核型分析。利用人类囊胚核型分析，在胚胎发育早期就可以对胎盘组织的嵌合情况进行检测。

1.2原位杂交

原位杂交是检测单个细胞染色体组成及其数目的有效方法之一。特异性DNA探针可以与固定后的间期或中期染色体发生杂交。该方法适用于那些染色体不易获得的样本诸如种植前胚胎。早期的非放射性原痊染色杂交应用是酶标记法，但是目前酶标记法已经被荧光标记替代，而且荧光标记检测的速度快、特异性强、敏感度较高。染色体荧光原位杂交（FISH）是用荧光染料对DNA探针进行标记。探针类型一般包括：中心粒探针、位点特异性探针及着色探针（painting probe）。中心粒型及位点特异性探针有助于对间期染色体进行结构分析。着色探针适于对中期染色体进行结构分析。多条染色体FISH检测时每个DNA探针都要用不同的荧光染料进行标记。而且FISH检测的缺点是仅仅能够提供有限的染色体信息（由特异性探针的类型及数量而定）。近来有报道认为FISH可以同时检测多达5条以上的不同染色体。光学显微镜核型分析（FISH检测的一种）也可以对大量的间期染色体进行定量分析，而且检测的染色体条带可达10条以上。光学显微镜核分析最大的优点是，几乎所有的胚胎以及90%的卵裂球都可以获得检测结果。

2、人类种植前胚胎的染色体组成

Delhanty等建议对种植前人类胚胎进行细胞遗传学分类，主要分为4类。细胞遗传学分类不但有利于人类种植前胚胎进行染色体分析，而且还适用于核型分析。四种细胞遗传学类型分别为：正常用于核型分析。四种细胞遗传学类型分别为：正常型，同一枚胚胎的所有细胞均正常（二倍体）；异常型，同 覆盖胚胎的所有细胞均不正常（所有细胞含有相同的异常染